摘要:

摘要:实验采用BALB/c小鼠作为实验动物，旨在建立尼罗罗非鱼无乳链球菌毒力测定的BALB/c小鼠模型。BALB/c小鼠经腹腔注射尼罗罗非鱼源无乳链球菌建立感染模型，比较了尼罗罗非鱼源无乳链球菌分别感染尼罗罗非鱼和小鼠的LD₅₀差异，分别测定了不同毒力尼罗罗非鱼无乳链球菌对尼罗罗非鱼和小鼠的毒力。结果显示，小鼠经腹腔注射无乳链球菌，在24 h内出现死亡现象，且对小鼠脑、肝脏、脾脏、肾脏等组织造成损伤。3次测定尼罗罗非鱼无乳链球菌TFJ0901对尼罗罗非鱼和小鼠LD₅₀分别为7.7×10⁷、2.2×10⁸、3.5×10⁹ CFU/mL和405、361、419 CFU/只。将无乳链球菌TFJ0901和THN0901感染尼罗罗非鱼（1.0×10⁷ CFU/mL）和小鼠（100 CFU/只），尼罗罗非鱼和小鼠存活率分别为100%、6.7%±5.8%和100%、0，其存活率都具有显著性差异。将无乳链球菌TFJ0901和TFJ-F感染尼罗罗非鱼（3.0×10⁸ CFU/mL）和小鼠（2 500 CFU/只），尼罗罗非鱼的存活率分别为73.3%±11.5%和80.0%±10.0%，存活率差异不显著，小鼠存活率分别为13.3%±11.5%和100.0%，存活率具有显著性差异。研究表明，本实验成功建立了BALB/c小鼠作为尼罗罗非鱼源无乳链球菌毒力测定的稳定模型，测定不同毒力的尼罗罗非鱼源无乳链球菌对小鼠毒力与对尼罗罗非鱼毒力一致，且该模型能够区分尼罗罗非鱼模型难以区分的毒力相近的无乳链球菌。

摘要:为研究病害发生后卵形鲳鲹肠道菌群结构的差异及其与养殖环境的关系，分析不同样品中的菌群组成和细菌多样性。实验采用Illumina HiSeq高通量测序技术和生物信息学分析手段，分别构建了健康鱼水样、患病鱼水样、健康鱼肠道、患病鱼肠道和饵料颗粒5个样品中菌群的16S rRNA基因测序文库。研究表明，与健康鱼肠道细菌组成相比，患病鱼肠道中螺旋体门相对丰度显著升高，厚壁菌门和拟杆菌门相对丰度显著降低；患病后肠道中的细菌种类仅为健康鱼肠道细菌种类总数的54.94%；健康卵形鲳鲹肠道菌群中有73.46%的可操作分类单元（OTUs）与水体样品中OTUs一致，有70.58%与饲料样品一致，而患病后分别只有17.98%和38.95%的OTUs与水体和饲料样品一致。健康卵形鲳鲹肠道中黑海弧菌的相对丰度为17.19%，患病后该菌的相对丰度大幅提高，达到78.90%；健康鱼肠道中鳆发光杆菌占比54.53%，患病鱼肠道中不含鳆发光杆菌。健康和患病鱼肠道菌群种类组成类似，但存在一定差异，病害的发生会导致肠道细菌多样性显著降低。健康鱼肠道菌群与养殖环境和颗粒饲料中菌群组成关系密切，而患病后鱼肠道细菌多样性受环境中菌群的影响较小。黑海弧菌在患病鱼肠道中的大量增殖可能是引起其患病的重要原因。

摘要:由刺激隐核虫寄生感染而引起的"白点病"成为大黄鱼养殖生产中危害最为严重的病害之一。为研究刺激隐核虫对大黄鱼的致病力及复方中草药HD-2对刺激隐核虫世代繁殖的抑制和阻断其感染的效果，本研究在测定了患病大黄鱼产生刺激隐核虫包囊数量、大小、孵化率和幼虫产率的基础上，测定了幼虫体外存活时间和感染力。同时，研究了HD-2中草药液对刺激隐核虫幼虫、滋养体和包囊的杀除效果以及口服复方中草药HD-2对患病大黄鱼的治疗效果。结果显示，自然患病大黄鱼体型规格与产生包囊总数呈正相关，包囊直径为（340.8±64.9） μm，平均孵化率为76.4%，每个包囊可产生280±42.5个幼虫；幼虫体外最长存活时间超过24 h，幼虫孵化20 h后便丧失感染力。幼虫感染大黄鱼7 d的LD₉₀为9 712个幼虫/尾，LD₅₀为4 366个幼虫/尾。HD-2中草药液可有效杀灭刺激隐核虫幼虫，分别口服含复方中草药5、10和15 g/kg 饲料30 d的实验组大黄鱼在LD₅₀攻毒剂量下其相对感染强度较对照组分别下降32.0%、44.5%和51.8%，包囊体积较对照组分别减少35.4%、36.1%和37.3%，孵化率分别下降16.3%、23.3%和27.9%；在LD₉₀攻毒剂量下3个实验组大黄鱼的存活率分别达到40.0%、55.0%和58.3%，显著高于对照组（8.3%），且鳃丝、胸鳍上滋养体数量较对照组显著下降。口服复方中草药HD-2对自然患病大黄鱼的治疗效果表明，采集口服15 d的3组大黄鱼的包囊数量分别较对照组下降73.1%、87.7%和93.8%，鱼体死亡率分别为58.3%、36.7%和21.7%，较对照组83.3%的死亡率明显降低，且用药组大黄鱼的生理状态明显优于对照组。由此可见，口服复方中草药HD-2能有效阻断刺激隐核虫的二次感染，抑制包囊的形成和发育，降低包囊孵化率和幼虫孵化数量，从而有效抑制了虫体的世代繁殖。

摘要:通过药物体外抑菌效果及对斜带石斑鱼抗病力影响的研究，筛选有效治疗斜带石斑鱼溶藻弧菌病复方中草药与中西药联用配方。用诃子、白芍、甘草比例分别为0.9：1.3：0.9、1.2：0.9：1.0和1：1：1的复方中草药对溶藻弧菌进行体外抑菌实验；将质量分数为2.2%的复方中草药与中西药联用添加到基础饲料中设为实验组，研究中西药对斜带石斑鱼溶藻弧菌病治疗效果。复方中草药实验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ为投喂饲料中添加不同比例诃子、白芍、甘草，中西药联用实验组Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ分别为投喂饲料中添加不同比例诃子、白芍、甘草、恩诺沙星。结果显示，复方中草药配方二药物质量浓度200 mg/mL，为最佳配方。40 d病鱼死亡数量比较结果为对照组Ⅱ > 对照组Ⅳ > 对照组Ⅲ > 实验组Ⅲ > 实验组Ⅱ > 实验组Ⅰ > 实验组Ⅴ > 实验组Ⅵ > 实验组Ⅳ > 对照组Ⅰ。实验组Ⅰ投喂饲料加诃子、白芍、甘草比例为0.9：1.3：0.9的复方中草药，实验组Ⅳ配方为诃子、白芍、甘草、恩诺沙星比例为0.9：1.3：0.9：1.3，分别为治疗斜带石斑鱼溶藻弧菌病效果最好的复方中草药和中西药联用配方。研究表明，中西药联用复方药效强于复方中草药，均能较好治疗斜带石斑鱼溶藻弧菌病。

摘要:探究凡纳滨对虾和罗氏沼虾肠道微生物及抗生素抗性基因（antibiotic resistance genes， ARGs）种类的差异。通过高通量测序和变性梯度凝胶电泳（denaturing gradient gel electrophoresis， DGGE）技术分析2种虾肠道微生物群落结构差异和微生物多样性，并运用PCR方法检测了2种虾肠道细菌常见38种ARGs的携带情况。结果显示，获得凡纳滨对虾和罗氏沼虾肠道细菌有效序列分别为42 795和40 713条，物种注释单元（operational taxonomic unit， OTU）数目分别为124和82，分类地位明确的细菌种类分别隶属5个门、17个属和5个门、16个属。凡纳滨对虾肠道细菌的优势类群为变形菌门，所占比例为75.45%，优势菌属为副球菌属（25.83%）和不动杆菌属（25.24%）；罗氏沼虾肠道细菌的优势类群是厚壁菌门（49.74%），优势菌属为乳球菌属（49.01%）和弧菌属（29.98%）。凡纳滨对虾肠道细菌（2.19）Shannon指数高于罗氏沼虾肠道细菌（1.78），表明前者肠道细菌多样性大于后者。DGGE图谱的分析结果与高通量测序一致，2种虾肠道细菌种类差异很大。PCR结果显示，凡纳滨对虾肠道细菌携带15种ARGs，罗氏沼虾肠道细菌携带14种ARGs。本实验表明凡纳滨对虾肠道细菌的群落种类多样性、OTU丰富度、物种总数和ARGs种类均高于罗氏沼虾肠道细菌，为后续肠道微生物资源的挖掘提供了理论依据。

摘要:为确定患病半滑舌鳎的病原，从其体内分离到3株革兰氏阴性菌，将其分别命名为ST-1、ST-3和ST-6，进行细菌理化特性、药敏试验、16S rDNA测序以及组织病理学观察等方面的研究，并建立了外膜蛋白（OMP）基因的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。结果显示，3株分离菌株的理化特性符合创伤弧菌特征，16S rDNA与创伤弧菌标准菌株ATCC29307序列相似性达99%以上，系统发育树分析显示，3株分离株与创伤弧菌自然聚为一支，最终鉴定为创伤弧菌；药敏试验显示，3株菌对头孢克肟、头孢哌酮、链霉素、亚胺培南和氟苯尼考等药物高度敏感。人工回归感染试验表明，分离株具有致病性，且半滑舌鳎、斑马鱼的临床症状与自然患病鱼症状相似；组织病理学观察显示，鳃丝上皮细胞增生，鳃小片肿胀黏连、颗粒细胞和黏液细胞增多，肝脏中央静脉淤血，肾脏出血、坏死，肠道黏膜固有层萎缩、黏液细胞增多等。进一步建立OMP基因的荧光定量PCR方法，结果显示，标准曲线的相关系数为0.995，检测下限为1.88×10² CFU/mL。以上结果可为半滑舌鳎弧菌病的致病机理、分子诊断和防治提供科学参考。

摘要:鲫疱疹病毒（Carassius auratus herpesvirus， CaHV）是一种引起鲫急性鳃出血症和高死亡率的病毒病原。病毒要借助功能基因与细胞组分（如细胞器）的相互作用才能完成感染与复制。本实验通过生物信息分析、PCR扩增、重组质粒构建及其与细胞器标记质粒共转染鱼细胞（epithelioma papulosum Cyprinid， EPC）的荧光观察，对预测鲫疱疹病毒基因CaHV-31R编码蛋白的特性、亚细胞定位及与细胞器共定位进行研究。结果显示，鲫疱疹病毒编码蛋白CaHV-31R由313个氨基酸组成，含一个跨膜结构域（248~270 aa）和一个RNase E/G家族蛋白的典型结构域（40~182 aa）；与5种来源鲤疱疹病毒同源蛋白多重比对发现，与鲤疱疹病毒Ⅱ型中的日本株ST-J1和中国株SY-C1的同一性较高（分别为100%和80.7%），与鲤疱疹病毒I型代表株CyHV-1的同一性居中（为26.5%），而与鲤疱疹病毒Ⅲ型中的德国株CyHV-3（或称锦鲤疱疹病毒Koi herpesvirus，KHV）和中国株CyHV-3-GZ11 的同一性最低（分别为20.7%和18.2%）；经基因扩增和构建真核重组质粒pEGFP-31R，当用其单独转染EPC细胞，绿色荧光信号主要在细胞质中呈弥散分布，少量在细胞质中或在细胞核外围呈点状分布；当用pEGFP-31R与内质网标记质粒pDsRed2-ER或与高尔基体标记质粒pDsRed2-Golgi共转染细胞，绿色荧光信号在胞质中的分布情况与单独转染时不同，分别能与2种有单层膜结构的细胞器-内质网和高尔基体共定位。研究表明，CaHV-31R是鲫疱疹病毒中一个能编码与细胞器共定位蛋白的基因。

摘要:本研究从患病的半滑舌鳎分离得到5株弧菌，对其进行种属鉴定，并研究其耐药性及分子水平耐药机制。采用生化检测方法和分子生物学方法（基因16S rRNA、HSP60和mreB）进行鉴定，结果显示，5株弧菌均为嗜芳香环弧菌。通过肉汤稀释法检测菌株对抗菌药物的耐药性，通过PCR扩增和测序技术检测菌株中耐药基因和4类整合子并对其携带基因盒进行分析。结果显示，5株嗜芳香环弧菌均对环丙沙星、链霉素、红霉素、氟苯尼考、氨苄西林、磺胺甲恶唑、复方新诺明和利福平耐药，且均携带qnr VC、bla_CARB-17、strA、strB和sul耐药基因。此外，菌株JS291和JS295携带I类整合子、qacEΔ1和sul1耐药基因；可变区携带基因盒分别为dfr16-aadA2和arr-3-dfrA27。5株嗜芳香环弧菌为多重耐药菌株，且多重耐药表型与耐药基因密切相关。

摘要:皮肤黏液是鱼类免疫防御的第一道防线。大弹涂鱼皮肤黏液对其免疫防御、渗透压维持以及适应水陆生活等方面具有重要意义。为深入了解大弹涂鱼皮肤黏液的蛋白质分子组成，对其皮肤黏液开展了抑菌活性分析和蛋白质组学分析。通过电刺激法收集大弹涂鱼皮肤黏液，采用打孔法比较了皮肤黏液和血清的抑菌活性差异；进一步利用鳗弧菌对大弹涂鱼进行诱导，采用生长曲线抑制法分析和比较了诱导前后皮肤黏液的抑菌活性差异。利用Shotgun质谱技术，结合大弹涂鱼皮肤转录组数据库，对大弹涂鱼皮肤黏液开展了蛋白质组学分析；进一步利用String软件对所鉴定的蛋白质开展了蛋白质相互作用预测。大弹涂鱼皮肤黏液具有广谱抑菌活性，鳗弧菌诱导后的大弹涂鱼皮肤黏液与诱导前相比，对部分革兰氏阴性菌的抑菌活性明显上升，但对其他菌株的抑菌活性差异不明显。从大弹涂鱼皮肤黏液中共鉴定各类蛋白质分子97种，基本分子组成与其他硬骨鱼类皮肤黏液蛋白相似，但也有少数蛋白如泛素蛋白、胸腺素蛋白等未在其他鱼类皮肤黏液中报道。此外，其他鱼类中所鉴定到的部分蛋白如热休克蛋白、抗菌肽等在大弹涂鱼皮肤黏液中未能鉴定到。大弹涂鱼皮肤黏液中已鉴定的蛋白多数具有与免疫功能相关的结构域，且存在一个以肌动蛋白为核心的相互作用网络。大弹涂鱼皮肤黏液具有明显的广谱抑菌活性，其蛋白质组成与其他鱼类皮肤黏液具有一定的相似性。本研究为深入了解大弹涂鱼皮肤黏液的分子多样性及功能机制奠定了基础。

摘要:为分离获得AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体，并鉴定及研究其生物学特性，本研究以AHPND致病型副溶血性弧菌为宿主菌，采用双层平板法分别从中国福建及墨西哥海水样本中对其噬菌体进行分离；通过噬菌斑形态、限制性内切酶、全基因组测序构建系统发育树及透射电镜观察对所获噬菌体进行分类鉴定；同时对供试噬菌体裂解谱及其生物学特性进行测定，包括最佳感染复数（MOI）、pH稳定性、热稳定性、过氧乙酸稳定性及不同储存温度下的存活稳定性等。结果显示，本研究分离获得3株AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体P46、P48及VP7，3株噬菌体的噬菌斑均呈透亮圆形，P46噬菌斑直径4~5 mm，P48与VP7噬菌斑直径5~6 mm。3株噬菌体核酸均为双链DNA，电镜下观察其头部均呈二十面立体结构，直径约60 nm，尾部宽约8 nm，长约18~20 nm，属于短尾噬菌体科。3株供试噬菌体对AHPND型副溶血性弧菌裂解率达91.5%，对非AHPND型副溶血性弧菌裂解率为92.3%，且无法识别除副溶血性弧菌外其他种属的细菌；噬菌体P46、P48及VP7感染AHPND致病型副溶血性弧菌的最佳MOI分别为0.001、0.1及0.001；P46与VP7最适pH为6~8，P48最适pH为6~9；3株噬菌体对60℃的温度耐受力较强，在4℃条件下存放50周后仍具有较高的存活率；对通用杀菌浓度的过氧乙酸具有一定耐受性。将噬菌体P46、P48及VP7保守蛋白序列在NCBI数据库中比对后发现，3株供试噬菌体与其他噬菌体同源性较低，因此，噬菌体P48与P46及VP7很可能为3株新发现的短尾科噬菌体，这是中国首次报道AHPND致病型副溶血性弧菌短尾科噬菌体。本研究丰富了AHPND致病型副溶血性弧菌噬菌体的菌种资源，并为其应用于噬菌体生物防治制剂的开发奠定了理论基础。

摘要:为了探究microRNA（miRNA）对乌鳢水泡病毒（snakehead vesiculovirus， SHVV）感染月鳢细胞（striped snakehead cell， SSN-1）的影响，本研究对SHVV感染的SSN-1细胞及未感染的细胞进行miRNA高通量测序。分别用U6、β-actin和5S rRNA作为内参基因研究SHVV感染对细胞内22个高丰度（transcripts per million， TPM ≥ 1 000） miRNA表达水平的影响，结果显示，U6基因作为内参时，SHVV感染对β-actin没有显著影响，但是5S rRNA显著上调表达，说明U6和β-actin基因适合作为内参基因研究SHVV感染对miRNA表达水平的影响。此外，我们研究了14种miRNA对SHVV增殖的影响。结果发现，miR-27a-3p、miR-26a-5p、miR-30e-3p等11种miRNA显著促进SHVV增殖，miR-150和miR-216b显著抑制SHVV增殖。进一步研究发现高丰度的miR-100-5p在SHVV感染SSN-1细胞早期上调表达，晚期下调表达。过表达miR-100-5p可以显著抑制SHVV的增殖，而抑制表达miR-100-5p可以显著促进SHVV的增殖。本研究为开发抗SHVV的核酸药物提供了理论基础。

摘要:为了解龟类临床兽医学的麻醉术问题，根据预实验结果选择动物医学推荐的临床麻醉药物舒泰（唑拉西泮：替来他明=1：1）对中华草龟进行麻醉实验，比较不同注射剂量的舒泰对中华草龟的麻醉效果，并使用高效液相色谱法（HPLC）测定舒泰中唑拉西泮和替来他明在中华草龟血浆中的浓度，用药物代谢动力学软件PKsolver 2.0来分析其药物代谢动力学特征。结果发现，肌肉注射舒泰剂量为25 mg/kg时，对中华草龟麻醉的诱导期、麻醉期和苏醒期的时长分别为0.42、4.33和4.14 h，舒泰对中华草龟的麻醉效果较好，符合临床手术的要求。唑拉西泮和替来他明在中华草龟体内的药时曲线均符合一次式二室开放模型，唑拉西泮的药物代谢动力学方程为C=13.462e^-0.223t+2.127e^-0.055t，主要药物代谢动力学参数为达峰浓度C_max=11.695 μg/mL、达峰时间T_max=1.060 h和药时曲线下面积AUC=92.470 μg/（mL·h）；替来他明的药物代谢动力学方程为C=10.619e^-0.203t+0.279e^-0.047t，主要药物代谢动力学参数为达峰浓度C_max=9.654 μg/mL、达峰时间T_max=0.482 h和药时曲线下面积AUC=56.348 μg/（mL·h）。结合麻醉效果分析，唑拉西泮和替来他明血药浓度分别达到8.12和8.96 μg/mL时，可以使健康的中华草龟进入麻醉期，为维持麻醉状态，唑拉西泮和替来他明的血药浓度应不低于7.18和4.73 μg/mL。

摘要:近年来，条纹海马的养殖在我国发展迅速，但由于多种养殖疾病的频繁暴发，严重制约了条纹海马养殖业的健康发展。自2017年以来，我国北方地区在条纹海马的养殖过程中，多次发生表皮溃疡综合征，患病海马游泳能力减弱，皮肤大面积溃疡，同时伴随烂尾症状，解剖后发现其肠道发白，肝脏及鳃颜色暗淡，死亡率较高，给海马养殖业造成巨大的经济损失。本研究从患病条纹海马的溃烂肌肉及肠道中分离出13株优势菌株，经回归感染实验证实菌株HDM-2可引起条纹海马出现表皮溃疡综合征的类似症状，且半数致死量（LD₅₀）约为2.89×10⁸ CFU/mL。为确定菌株HDM-2的分类地位，采用生理生化及基于16S rDNA的分子生物学方法对其进行鉴定，结果显示，HDM-2为哈维氏弧菌；为了解菌株HDM-2的菌体特征，采用透射电镜（TEM）对菌株HDM-2进行观察，结果显示，HDM-2为周生鞭毛，有荚膜，大小约2.20 μm×4.75 μm；为获知HDM-2的抗生素敏感性，采用纸片扩散法进行药敏试验，结果显示，菌株HDM-2对氟苯尼考和头孢他啶等较敏感；患病条纹海马的组织病理学研究表明，菌株HDM-2对条纹海马的皮肤、肝脏以及鳃组织损伤较严重。本文可为条纹海马表皮溃疡综合征的防治及深入研究提供基础资料。